Plasmide CRISPR/Cas9 KO PCGF3 (h): sc-405260

Présentation

PCGF3 (polycomb group ring finger 3) est un composant central du complexe répressif Polycomb 1 (PRC1) non canonique. Il fonctionne comme une ligase E3 de l’ubiquitine en association avec RING1A/RING1B pour catalyser la monoubiquitination de l’histone H2A (H2AK119ub). Par cette activité, PCGF3 contribue à la répression transcriptionnelle médiée par Polycomb, à la mémoire épigénétique et à la compaction de la chromatine, qui aident à coordonner les programmes d’expression génique du développement et les décisions de destinée cellulaire. Les complexes PRC1 contenant PCGF3 s’inscrivent dans des réseaux plus larges de régulation de la chromatine, notamment l’équilibre Polycomb/Trithorax et le dialogue avec la méthylation de H3K27 dépendante de PRC2. La dérégulation de la signalisation Polycomb et de la composition en sous-unités de PRC1 est fréquemment impliquée dans un silence génique aberrant et une reprogrammation transcriptionnelle observés dans le cancer et d’autres troubles d’étiologie épigénétique, ce qui motive des études mécanistiques de la fonction de PCGF3 dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PCGF3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PCGF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PCGF3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PCGF3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PCGF3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PCGF3 pour l'étude de la signalisation de PCGF3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PCGF3 essentiels à la fonction de PCGF3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PCGF3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PCGF3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PCGF3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PCGF3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PCGF3 plasmide HDR (h) et le PCGF3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PCGF3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PCGF3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.