Plásmido CRISPR de Activación (h) PCDHGA11: sc-407326-ACT

PCDHGA11 codifica la protocadherina gamma-A11, una proteína de adhesión celular dependiente de calcio de la familia de protocadherinas agrupadas que contribuye al reconocimiento célula–célula y a la arquitectura tisular. Las protocadherinas favorecen la señalización dependiente del contacto, la organización de membrana y la dinámica del citoesqueleto, lo que influye en la conectividad neuronal y en interacciones más amplias de células epiteliales o inmunitarias. Los patrones alterados de expresión de protocadherinas se asocian con frecuencia a una adhesión desregulada y a programas de linaje anómalos observados en fenotipos del neurodesarrollo y en procesos relacionados con el cáncer. Como parte de redes de adhesión y de receptores de superficie, PCDHGA11 se estudia por su impacto en la identidad celular, la organización sináptica o de uniones, y los estados transcripcionales posteriores al contacto intercelular.

PCDHGA11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PCDHGA11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

PCDHGA11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PCDHGA11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PCDHGA11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de PCDHGA11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PCDHGA11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de PCDHGA11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía PCDHGA11 en células tumorales con expresión de PCDHGA11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.