Plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-7 (m): sc-422120

Présentation

Pax7 code Pax-7, un facteur de transcription à boîte appariée (paired box) qui définit et maintient les cellules satellites du muscle squelettique et coordonne l’engagement de la lignée myogénique au cours du développement et de la régénération. Pax-7 régule des programmes d’expression génique contrôlant l’auto-renouvellement, la survie et la différenciation des progéniteurs, et s’articule avec des réseaux de signalisation tels que Notch et Wnt, qui ajustent la quiescence et l’activation des cellules souches. Dans des modèles murins, une fonction altérée de Pax-7 perturbe la dynamique de réparation musculaire et l’homéostasie du pool de cellules satellites, ce qui soutient sa pertinence pour l’étude des mécanismes à l’origine de l’atrophie musculaire, d’une régénération déficiente et des myopathies développementales. Pax-7 est également utilisé comme marqueur et régulateur en biologie neuromusculaire et dans les études du destin cellulaire, où le contrôle transcriptionnel de la myogenèse constitue un paramètre clé.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Pax-7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Pax7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Pax7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Pax7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Pax-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Pax7 pour l'étude de la signalisation de Pax-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Pax7 essentiels à la fonction de Pax-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Pax7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Pax-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Pax-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Pax7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Pax-7 plasmide HDR (m) et le Pax-7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Pax7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Pax7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.