PAOX Plasmide Double Nickase (h): sc-406710-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PAOX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PAOX Double Nickase Plasmid (h) e il PAOX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PAOX. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PAOX Plasmide Double Nickase (h) | sc-406710-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PAOX Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406710-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La PAOX (poliammine ossidasi) umana è un enzima flavino-dipendente che catalizza l’ossidazione della N1-acetilspermina e della N1-acetilspermidina, contribuendo alla retro-conversione delle poliammine e all’omeostasi cellulare delle poliammine. Attraverso la produzione di spermidina/putrescina e di sottoprodotti reattivi come il perossido di idrogeno, l’attività della PAOX collega il metabolismo delle poliammine all’equilibrio redox e alla segnalazione dello stress ossidativo. Questa via si interfaccia con processi quali proliferazione cellulare, differenziamento e risposte allo stress, modulando i pool intracellulari di poliammine. La disregolazione del catabolismo delle poliammine e il correlato stress ossidativo sono stati studiati in contesti quali la biologia dei tumori, la neurodegenerazione e il danno tissutale infiammatorio, a supporto dell’utilità della PAOX come bersaglio per indagini meccanicistiche.
PAOX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PAOX nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PAOX. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PAOX. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PAOX interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.