Plasmide CRISPR d'Activation (h) p120: sc-400943-ACT

CTNND1 code pour la p120-caténine (p120), une protéine à répétitions armadillo qui se lie à la région juxtamembranaire des cadherines classiques et stabilise les jonctions d’adhérence en limitant l’endocytose et le renouvellement des cadherines. En coordonnant les complexes cadherine–caténine avec la signalisation des GTPases de la famille Rho, p120 influence la dynamique du cytosquelette d’actine, la polarité épithéliale et le contrôle de la croissance dépendant du contact, en s’articulant avec des voies qui régulent la migration cellulaire et la morphogenèse tissulaire. Une expression altérée de CTNND1 ou une localisation anormale de p120 a été associée à une perturbation des programmes d’adhérence cellule–cellule et à des phénotypes invasifs dans des modèles de cancer, et les perturbations de CTNND1 sont également étudiées dans le contexte de troubles du développement touchant la biologie cranio-faciale et épithéliale.

p120 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CTNND1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

p120 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CTNND1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CTNND1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de p120. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CTNND1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de p120 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie p120 dans les cellules tumorales présentant une expression de CTNND1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.