OLIG2 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424530-ACT

Olig2 は、発生期および成体マウスの中枢神経系における神経系譜の規定を統括する、塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）型転写因子 OLIG2 をコードしている。OLIG2 は、神経新生（proneural）およびグリア系の制御ネットワークと連携して、前駆細胞の増殖・遊走・運命決定を制御し、とりわけ運動ニューロンとオリゴデンドロサイトの分化、ならびにミエリン関連遺伝子プログラムにおいて重要な役割を担う。その活性は、神経パターニングやクロマチン状態を形成する発生シグナル伝達経路と交差し、領域アイデンティティを規定する転写プログラムに影響を及ぼす。OLIG2 の発現異常や系譜プログラムの破綻は、異常な前駆細胞挙動やグリア運命制御のモデルとして、神経発達障害、脱髄病態、ならびにグリオーマの生物学において広く研究されている。

OLIG2 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Olig2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

OLIG2 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Olig2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はOlig2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性OLIG2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のOlig2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるOLIG2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびOlig2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるOLIG2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。