Plásmido CRISPR de Activación (h) OLIG2: sc-400670-ACT

OLIG2 codifica un factor de transcripción básico de tipo hélice-bucle-hélice que coordina la especificación de linajes neurales, con funciones destacadas en el patrón del tubo neural ventral y en el compromiso de los programas de precursores de oligodendrocitos y de motoneuronas. A través de redes transcripcionales específicas de cada etapa, OLIG2 se integra con vías de señalización del desarrollo como SHH y Notch para regular la proliferación de progenitores, el momento de la diferenciación y las decisiones de destino glial. La expresión desregulada de OLIG2 se estudia con frecuencia en el contexto de anomalías del neurodesarrollo y de la biología de tumores cerebrales, donde se ha vinculado con alteraciones en el control del estado celular y de la capacidad proliferativa. Como regulador definitorio de linaje, OLIG2 sirve como un nodo clave para diseccionar circuitos de regulación génica que gobiernan el comportamiento de células madre/progenitoras neurales y la maduración oligodendroglial.

OLIG2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de OLIG2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

OLIG2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus OLIG2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional OLIG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de OLIG2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo OLIG2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de OLIG2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía OLIG2 en células tumorales con expresión de OLIG2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.