OC-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-434195

Panoramica

Onecut3 (OC-3) è un fattore di trascrizione homeobox della famiglia ONECUT nel topo, che si lega a specifici motivi del DNA per coordinare le decisioni sul destino cellulare e la definizione dei pattern tissutali durante lo sviluppo. Contribuisce a programmi di regolazione genica coinvolti in differenziamento, morfogenesi e mantenimento di identità cellulari specializzate, integrandosi con reti trascrizionali più ampie che guidano l’organogenesi. In quanto regolatore nucleare, OC-3 influenza vie a valle che governano la specificazione di linea e la maturazione, rendendolo rilevante per studi di biologia dello sviluppo e del controllo epigenetico della trascrizione. Programmi trascrizionali associati a Onecut3 deregolati sono stati collegati in letteratura a stati di differenziamento alterati e a fenotipi rilevanti per la malattia in sistemi modello in cui le vie di sviluppo risultano perturbate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OC-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Onecut3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Onecut3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Onecut3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OC-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Onecut3 per lo studio della segnalazione di OC-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Onecut3 critici per la funzione di OC-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Onecut3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OC-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal OC-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Onecut3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OC-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR OC-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Onecut3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Onecut3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.