OB-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401051-ACT

CDH11 codifica a OB-caderina, uma caderina clássica que medeia a adesão homofílica célula–célula dependente de Ca²⁺ e sustenta a morfogênese tecidual, a coesão mesenquimal e a organização do estroma. O engajamento da OB-caderina conecta-se às cateninas e ao citoesqueleto de actina, influenciando a estabilidade das junções, a mecanotransdução e a sinalização dependente de contato, que se cruza com vias como Wnt/β-catenina e a dinâmica do citoesqueleto regulada por GTPases da família Rho. Na biologia humana, CDH11 está fortemente associado a programas de linhagem de fibroblastos e osteoblastos e contribui para a remodelação da matriz extracelular e fenótipos migratórios. A expressão desregulada de CDH11 foi relatada em contextos como fibrose, ativação estromal relacionada à artrite e interações tumor–estroma, tornando-o relevante para estudos de sinalização dependente de adesão e regulação do microambiente.

OB-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OB-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OB-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OB-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OB-cadherin em células tumorais com expressão de CDH11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.