NR5A2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-424058-ACT

Mouse Nr5a2 kodiert den nukleären Rezeptor NR5A2 (LRH-1), einen DNA-bindenden Transkriptionsfaktor, der Programme reguliert, die den Lipid- und Gallensäurestoffwechsel, die Steroidogenese sowie die epitheliale Differenzierung steuern. NR5A2 integriert verschiedene Signalinputs, um Transkriptionsnetzwerke zu koordinieren, die an der Entwicklungsfestlegung und der Gewebehomöostase beteiligt sind, einschließlich Signalwege, die mit metabolischer Regulation und Entzündungsreaktionen verknüpft sind. Im Pankreas und Darm beeinflusst NR5A2 die exokrine Funktion und die Erneuerung des Epithels; veränderte NR5A2-Aktivität wurde zudem mit metabolischen Phänotypen und onkogenen Transkriptionszuständen in gastrointestinalen Geweben in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen Nr5a2 zu einem nützlichen Ziel, um nukleäre Rezeptor-gestützte Genregulation, chromatinabhängige Transkriptionskontrolle und kontextspezifische Linienprogramme in Mausmodellsystemen zu untersuchen.

NR5A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nr5a2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NR5A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nr5a2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nr5a2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NR5A2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nr5a2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NR5A2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NR5A2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nr5a2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.