NF90 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402626-NIC

ILF3 codifica a NF90, uma proteína de ligação a RNA de dupla fita que atua na regulação pós-transcricional da expressão génica ao modular a estabilidade do mRNA, o splicing, a exportação nuclear e a tradução, frequentemente em conjunto com a NF45 e outros parceiros ribonucleoproteicos. A NF90 participa em respostas antivirais inatas e em programas adaptativos ao stress ao influenciar transcritos relacionados com interferão e vias do metabolismo de RNA, e pode também afetar o controlo do ciclo celular através da regulação seletiva de mRNAs associados ao crescimento. Por meio das suas interações com a maquinaria de transcrição e de processamento de RNA, a NF90 ajuda a coordenar programas de expressão génica ligados à proliferação, à diferenciação e à sinalização de stress celular. A desregulação de ILF3/NF90 tem sido associada a alterações da homeostase de RNA em contextos relevantes para a biologia tumoral e fenótipos inflamatórios, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos da regulação dependente de RNA.

NF90 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ILF3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ILF3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ILF3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ILF3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.