NCX3 Double Nickase Plasmid (m): sc-431066-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NCX3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NCX3 Double-Nickase-Plasmid (m) und NCX3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Slc8a3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NCX3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-431066-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NCX3 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-431066-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Slc8a3 kodiert den murinen Na⁺/Ca²⁺-Austauscher NCX3, einen Transporter der Plasmamembran, der zur Aufrechterhaltung der intrazellulären Ca²⁺-Homöostase beiträgt, indem er den Ca²⁺-Ausstrom (oder unter bestimmten elektrochemischen Bedingungen auch den Einstrom) an Na⁺-Gradienten koppelt. Durch die Formung der zytosolischen Ca²⁺-Dynamik beeinflusst NCX3 die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung, synaptische Signalübertragung und die mitochondriale Ca²⁺-Handhabung und ist damit in umfassendere Calcium-Signalnetzwerke eingebunden, die Stoffwechsel, Membranerregbarkeit und Stressantworten regulieren. Die Aktivität von NCX3 ist besonders in erregbaren Geweben relevant, in denen eine schnelle Ca²⁺-Eliminierung erforderlich ist, darunter Neuronen und Muskulatur. Eine dysregulierte Na⁺/Ca²⁺-Austauschaktivität und Ca²⁺-Überladungssignalwege wurden mit Mechanismen der Neurodegeneration, Reaktionen auf ischämische Schädigung und myopathieassoziierter zellulärer Dysfunktion in Verbindung gebracht, was Slc8a3 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen macht.
NCX3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Slc8a3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Slc8a3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Slc8a3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Slc8a3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.