NAT-8L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-415533-ACT

Das humane Gen **NAT8L** kodiert **NAT-8L**, eine N‑Acetyltransferase, die die Bildung von **N‑Acetylaspartat (NAA)** aus Aspartat und Acetyl‑CoA katalysiert und damit die Verfügbarkeit von mitochondrialem Acetyl‑CoA mit dem Aminosäure- und Acetatstoffwechsel verknüpft. NAA ist an der zellulären Kohlenstoffverwertung und der Homöostase von Acetylgruppen beteiligt, mit nachgelagerten Auswirkungen auf die Lipidsynthese und myelinbezogene Prozesse im Nervensystem. Die Aktivität von NAT8L ist daher für metabolisches Remodeling und die Neuron‑Glia‑Kopplung relevant, und Störungen NAA‑assoziierter Signal- und Stoffwechselwege wurden mit neurologischen Phänotypen und neurodevelopmentalen Funktionsstörungen in Verbindung gebracht. Als messbarer metabolischer Knotenpunkt wird NAT8L häufig in Studien zu mitochondrialer Funktion, Acetylierungsbalance und Gehirnenergiestoffwechsel untersucht.

NAT-8L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NAT8L-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

NAT-8L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NAT8L-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NAT8L-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen NAT-8L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NAT8L-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von NAT-8L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des NAT-8L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NAT8L-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.