Myoferlin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403110-ACT

O MYOF humano codifica a mioferlina, uma grande proteína da família ferlin associada à membrana que regula a fusão de vesículas, a endocitose e o reparo de membrana por meio da ligação a lipídios dependente de Ca²⁺ e da coordenação de eventos de tráfego na membrana plasmática. A mioferlina contribui para a estabilização e a reciclagem de receptores tirosina-quinase, ligando-a à dinâmica de sinalização por fatores de crescimento, como vias impulsionadas por EGFR e as cascatas a jusante PI3K/AKT e MAPK. Ela também está implicada no remodelamento do citoesqueleto, na exocitose e na migração celular, com relevância funcional na miogênese e no comportamento angiogênico de células endoteliais. A expressão desregulada de MYOF tem sido associada a estados alterados de tráfego de membrana observados em modelos de invasão e metástase de células cancerosas, tornando-o um ponto útil para estudar a plasticidade de sinalização e as interações com o microambiente tumoral.

Myoferlin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYOF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Myoferlin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYOF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYOF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Myoferlin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYOF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Myoferlin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Myoferlin em células tumorais com expressão de MYOF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.