Plasmide CRISPR d'Activation (h) MyD88: sc-417166-ACT

MYD88 code pour MyD88, une protéine adaptatrice centrale de la signalisation des récepteurs de type Toll (TLR) et des récepteurs de l’interleukine‑1 (IL‑1R), qui couple l’engagement du récepteur à l’activation en aval de NF‑κB et des MAPK. Grâce à ses domaines TIR et de mort, MyD88 coordonne l’assemblage du complexe myddosome avec les kinases IRAK et TRAF6, favorisant l’expression de gènes inflammatoires et l’activation des cellules de l’immunité innée. Une signalisation MYD88 dérégulée est impliquée dans une production aberrante de cytokines, l’inflammation chronique et des programmes de signalisation oncogéniques dans certaines hémopathies malignes, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de la signalisation immunitaire. MYD88 interagit également avec des voies de survie cellulaire et de réponse au stress, soutenant la recherche sur les interactions croisées dépendantes du contexte entre la détection innée et le contrôle transcriptionnel.

MyD88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYD88 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MyD88 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYD88 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYD88, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MyD88. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYD88 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MyD88 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MyD88 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYD88 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.