Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myc: sc-400001-ACT

MYC code le facteur de transcription Myc, un régulateur central de la croissance cellulaire, du métabolisme et de la prolifération, qui module la transcription dépendante de l’ARN polymérase II en se liant aux éléments E-box et en coordonnant le recrutement de cofacteurs associés à la chromatine. Myc intègre des signaux issus de voies mitogènes telles que RTK/RAS/MAPK et PI3K/AKT/mTOR, façonnant des programmes qui contrôlent la biogenèse des ribosomes, la synthèse des nucléotides, la fonction mitochondriale et la progression du cycle cellulaire. Une régulation stricte de l’expression de MYC est essentielle au maintien de la différenciation et de l’homéostasie tissulaire, tandis qu’une dérégulation est fréquemment associée à l’instabilité génomique, à des états métaboliques altérés et à une reprogrammation transcriptionnelle oncogénique. En conséquence, MYC est largement étudié pour ses rôles en biologie tumorale, dans les réponses au stress et dans le contrôle transcriptionnel dépendant du contexte.

Myc Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myc Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myc. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myc au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myc dans les cellules tumorales présentant une expression de MYC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.