Plásmido CRISPR de Activación (h) Mucin 12/MUC12: sc-400505-ACT

MUC12 codifica la mucina 12, una mucina anclada a la membrana y fuertemente O‑glicosilada que contribuye al glucocálix epitelial y respalda la función de barrera en las superficies mucosas. Al moldear el microambiente pericelular, MUC12 puede influir en las interacciones célula–célula y célula–matriz, la organización de la membrana apical y las respuestas a estímulos inflamatorios en el epitelio gastrointestinal y en otros epitelios. La alteración de la expresión y la glicosilación de las mucinas se asocia con frecuencia con el remodelado epitelial, una diferenciación desregulada y cambios en los programas de adhesión y señalización. En consecuencia, MUC12 se estudia como un marcador y modulador dependiente del contexto en la inflamación mucosa y en los cánceres epiteliales, incluidas investigaciones sobre cómo la biología de las mucinas afecta a las interacciones entre el tumor y el microambiente.

Mucin 12/MUC12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MUC12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mucin 12/MUC12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MUC12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MUC12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mucin 12/MUC12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MUC12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mucin 12/MUC12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mucin 12/MUC12 en células tumorales con expresión de MUC12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.