Plasmide CRISPR d'Activation (h) mSin3B: sc-401638-ACT

Le gène humain **SIN3B** code **mSin3B**, un composant central du complexe corépresseur transcriptionnel **SIN3**, qui sert d’échafaudage aux histones désacétylases (notamment **HDAC1/2**) et à des régulateurs de la chromatine associés afin de façonner les états épigénétiques. Par ses interactions avec des facteurs de transcription spécifiques de séquence et des protéines se liant à la chromatine, mSin3B module des programmes géniques régissant le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation, la sénescence et la transcription en réponse au stress. Le remodelage de la chromatine dépendant de SIN3B influence la répression transcriptionnelle et les voies d’engagement de lignée, reliant son activité à des mécanismes pertinents pour la dérégulation transcriptionnelle oncogénique et l’altération des états de prolifération cellulaire. Comme les assemblages Sin3/HDAC intègrent de multiples signaux, **SIN3B** est fréquemment étudié dans des contextes où la répression épigénétique et la stabilité des réseaux transcriptionnels sont perturbées.

mSin3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SIN3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

mSin3B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SIN3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SIN3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de mSin3B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SIN3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de mSin3B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie mSin3B dans les cellules tumorales présentant une expression de SIN3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.