MO25 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404607
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- MO25 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico MO25, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MO25 Anticuerpo (919I2G): sc-517655
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
MO25 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404607 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CAB39 codifica MO25, una proteína andamiaje conservada que estabiliza y activa el complejo de la quinasa supresora tumoral LKB1 (STK11) junto con las seudoquinasas STRAD. A través de este complejo, MO25 favorece la fosforilación de quinasas de la familia AMPK, conectando el estado energético celular con vías que controlan el metabolismo, la polaridad celular, las respuestas al estrés y la regulación del crecimiento. La señalización dependiente de MO25 influye en la organización epitelial y la dinámica del citoesqueleto, procesos que con frecuencia se ven alterados en la biología del cáncer y en modelos de disfunción metabólica. Por ello, la actividad alterada del eje LKB1–STRAD–MO25 es relevante para estudios sobre el control de la proliferación, el sensado de nutrientes y los fenotipos asociados a la polaridad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO MO25 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CAB39 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CAB39 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CAB39 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MO25.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CAB39 para la investigación de la señalización de MO25, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CAB39 críticos para la función de MO25
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CAB39 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido MO25 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MO25 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CAB39. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MO25 (h) y el plásmido HDR MO25 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CAB39 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CAB39 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.