Plasmide CRISPR d'Activation (h) MN1: sc-404347-ACT

MN1 (meningioma 1) code un corégulateur transcriptionnel qui module des programmes d’expression génique impliqués dans la différenciation hématopoïétique et la prolifération cellulaire. MN1 interagit avec des réseaux de récepteurs nucléaires et de coactivateurs, influençant le contrôle transcriptionnel associé à la chromatine et les sorties transcriptionnelles spécifiques de lignée. Une expression dérégulée de MN1 est fortement associée à la biologie des hémopathies malignes myéloïdes, où des états transcriptionnels altérés contribuent au maintien aberrant des progéniteurs et à une différenciation entravée. En tant que régulateur nucléaire, MN1 est fréquemment étudié dans le contexte de complexes de facteurs de transcription et de circuits de régulation génique qui façonnent les décisions de destinée cellulaire.

MN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.