MLSN1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406812

Descripción general

TRPM1 codifica el canal catiónico MLSN1 de la subfamilia melastatina, un canal TRP permeable a Ca2+ que contribuye a la excitabilidad de la membrana y a la señalización intracelular de calcio. En las células bipolares ON de la retina, TRPM1 actúa como un efector clave aguas abajo del receptor metabotrópico de glutamato 6 (mGluR6) en la fototransducción, acoplando la entrada sináptica glutamatérgica a respuestas despolarizantes. Más allá de la retina, el flujo de calcio asociado a TRPM1 puede influir en programas de señalización que convergen con vías de segundos mensajeros y con la regulación transcripcional. La alteración genética o la desregulación de TRPM1 se ha asociado con defectos en la señalización visual y también se estudia en biología relacionada con la pigmentación, lo que respalda su relevancia para la neurobiología y los procesos asociados a los melanocitos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MLSN1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRPM1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRPM1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRPM1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MLSN1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRPM1 para la investigación de la señalización de MLSN1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TRPM1 críticos para la función de MLSN1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRPM1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MLSN1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MLSN1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRPM1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MLSN1 (h) y el plásmido HDR MLSN1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRPM1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRPM1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.