MLL Plasmide Double Nickase (h): sc-401307-NIC

KMT2A codifica la metiltransferasi istonica lisina N MLL, un regolatore centrale dello stato della cromatina che catalizza la metilazione di H3K4 su promotori ed enhancer per sostenere programmi trascrizionali che controllano lo sviluppo ematopoietico e le decisioni di destino cellulare. MLL agisce all’interno di complessi multiproteici che coordinano l’inizio e l’allungamento della trascrizione e interagisce con vie che governano l’espressione dei geni HOX e la memoria epigenetica. La compromissione, i riarrangiamenti o un’alterata regolazione di KMT2A perturbano le reti di espressione genica ed è fortemente implicata nella leucemogenesi e in una più ampia disregolazione epigenetica, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici del controllo trascrizionale. Le ricerche esaminano comunemente il rimodellamento della cromatina dipendente da MLL, il blocco della differenziazione e le interazioni con cofattori che modulano la trascrizione specifica di linea.

MLL Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KMT2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KMT2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KMT2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KMT2A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.