Mitofilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-429376

概要

マウスのImmtは、ミトコンドリア内膜の構造およびクリステ接合部の形成を維持するMICOS（mitochondrial contact site and cristae organizing system）複合体の中核構成因子であるミトフィリンをコードする。ミトフィリンはミトコンドリア超微細構造を支えるとともに、内膜と外膜の接触を協調し、さらに酸化的リン酸化に重要なタンパク質輸入や呼吸鎖の構築にも影響を与える。IMMTの機能破綻は、クリステ形態、ミトコンドリアダイナミクス、ならびに生体エネルギー恒常性を乱し、これらの過程は神経変性、心筋症、代謝異常、そしてがん細胞の適応に広く関与している。ミトコンドリアの構造と機能の連関における要として、Immtはアポトーシス感受性、マイトファジー、細胞ストレス応答を制御する経路の研究で頻繁に解析対象となっている。

Mitofilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるImmt遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Immt内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Immtのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Mitofilinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Mitofilinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Immt欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Mitofilinの機能に不可欠なImmtエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Immtゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Mitofilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMitofilin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Immt遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Mitofilin HDRプラスミド（m）および Mitofilin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはImmtホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のImmt標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。