Plásmido Doble Nickase (m) MIF: sc-421649-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)MIF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MIF (m) y el plásmido de doble nickasa MIF (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Mif. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: MIF Anticuerpo (D-2): sc-271631
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) MIF | sc-421649-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) MIF | sc-421649-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El factor inhibidor de la migración de macrófagos (MIF) es una citocina pleiotrópica codificada por el gen Mif del ratón que regula las respuestas inmunitarias innata y adaptativa, el tráfico de leucocitos y la señalización asociada al estrés. MIF interactúa con CD74/CD44 y con receptores de quimiocinas como CXCR2/CXCR4 para coordinar la actividad de las vías MAPK y NF-κB, modulando la producción de citocinas y los programas de supervivencia celular. También se vincula con la contrarregulación de los glucocorticoides y el control redox, conectando las señales inflamatorias con salidas metabólicas y proliferativas. La desregulación de la señalización de MIF se ha implicado en la inflamación crónica, la autoinmunidad y la remodelación inmunitaria asociada a tumores, lo que convierte a Mif en un objetivo frecuente de estudios mecanísticos en inmunología y biología del cáncer.
MIF El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Mif en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Mif. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Mif. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Mif alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.