Plasmide CRISPR/Cas9 KO MGRN1 (m): sc-421607

Présentation

Mgrn1 code pour la ligase E3 ubiquitine-protéine MGRN1, un régulateur du renouvellement des protéines dépendant de l’ubiquitine ainsi que du trafic endosomal–lysosomal dans les neurones et d’autres types cellulaires. MGRN1 module le tri des protéines membranaires et l’homéostasie des récepteurs, reliant l’ubiquitinylation aux voies de transport vésiculaire et de protéostasie. Chez la souris, une altération de la fonction de Mgrn1 a été associée à des phénotypes de neurodégénérescence et à des anomalies de pigmentation, ce qui souligne sa pertinence pour l’étude du maintien neuronal et de la biologie des mélanosomes. L’analyse de la signalisation ubiquitine-dépendante contrôlée par MGRN1 est utile pour comprendre comment des défauts de contrôle qualité des protéines et de trafic contribuent aux réponses cellulaires au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MGRN1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mgrn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mgrn1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mgrn1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MGRN1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mgrn1 pour l'étude de la signalisation de MGRN1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mgrn1 essentiels à la fonction de MGRN1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mgrn1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MGRN1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MGRN1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mgrn1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MGRN1 plasmide HDR (m) et le MGRN1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mgrn1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mgrn1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.