Mex3c Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-408878-ACT

Il gene umano MEX3C codifica Mex3c, una proteina legante l’RNA che contiene domini KH e un dominio RING finger di tipo C3H1, in grado di sostenere la regolazione genica post-trascrizionale attraverso il legame selettivo per sequenza agli mRNA, la loro localizzazione e il controllo della stabilità. Mex3c partecipa a reti del metabolismo dell’RNA che influenzano i programmi di traduzione e la differenziazione cellulare, collegandola alla proteostasi e all’adattamento della segnalazione in condizioni di stato metabolico variabile. Tra le connessioni funzionali riportate figurano la regolazione del turnover degli mRNA e processi associati all’ubiquitina che modellano la crescita cellulare e le risposte allo stress. Un’espressione deregolata di MEX3C è stata osservata in firme trascrizionali rilevanti per diverse patologie, a supporto del suo studio nei meccanismi alla base della disfunzione metabolica e del rimodellamento della regolazione dell’RNA associato al cancro.

Mex3c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MEX3C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mex3c Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MEX3C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MEX3C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mex3c. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MEX3C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mex3c nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mex3c nelle cellule tumorali con espressione di MEX3C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.