Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Mel-18 Double Nickase Plasmid (m): sc-423764-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Mel-18 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Mel-18 Double-Nickase-Plasmid (m) und Mel-18 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pcgf2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mel-18: sc-515329
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mel-18 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423764-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Mel-18 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423764-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pcgf2 kodiert Mel-18, ein RING-Finger-Protein der Polycomb-Gruppe, das in kanonischen PRC1-Komplexen wirkt und die Chromatinkondensation sowie die transkriptionelle Repression durch Ubiquitinierung von Histon H2A und durch Zusammenarbeit mit dem von PRC2 abgelagerten H3K27me3 reguliert. In Mauszellen trägt Mel-18 zu stabilen Genstilllegungsprogrammen bei, die Entwicklungsmuster, den Zustand von Stamm- und Vorläuferzellen sowie die Zellzykluskontrolle prägen, indem es die Zugänglichkeit an linienfestlegenden Genorten moduliert. Durch die Beeinflussung Polycomb-abhängiger Netzwerke wirkt sich Pcgf2 auf Differenzierungsverläufe und epigenetisches Gedächtnis aus – Prozesse, die in Modellen der onkogenen Transformation und der Immundysregulation häufig gestört sind. Die genetische Störung von Pcgf2 wird daher eingesetzt, um die Subunitspezifität von PRC1, Veränderungen der Chromatintopologie und kontextabhängige transkriptionelle Outputs zu untersuchen.
Mel-18 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pcgf2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pcgf2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pcgf2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pcgf2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.