Particules Lentivirales d'Activation (h) MDR1/ABCB1: sc-400178-LAC

ABCB1 code pour MDR1/la P-glycoprotéine (ABCB1), un transporteur d’efflux de la famille des transporteurs ABC (ATP-binding cassette) qui expulse à travers la membrane plasmique une large gamme de xénobiotiques et de métabolites endogènes. En régulant l’accumulation intracellulaire des médicaments et la détoxification cellulaire, MDR1 influence la pharmacocinétique et les fonctions de barrière dans des tissus tels que l’intestin, le foie, le rein et la barrière hémato-encéphalique. L’activité d’ABCB1 s’inscrit à l’interface des réseaux de réponse au stress cellulaire et de transport membranaire, modulant l’exposition aux composés cytotoxiques et contribuant aux phénotypes de résistance multidrogue. Une expression dérégulée d’ABCB1 a été associée à des modifications de la disposition des médicaments et à la chimiorésistance dans divers modèles tumoraux, ce qui en fait une cible clé pour les études de biologie des transporteurs et des mécanismes de résistance.

Les particules d'activation lentivirales MDR1/ABCB1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ABCB1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MDR1/ABCB1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ABCB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MDR1/ABCB1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ABCB1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.