MBNL1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-425296-LAC

Mbnl1 kodiert den Muskelblind-ähnlichen Spleißregulator 1 (MBNL1), ein RNA-bindendes Protein, das YGCY-Motive erkennt und dadurch alternatives Spleißen, mRNA-Lokalisierung und -Stabilität während der Entwicklung und Gewebehomöostase steuert. In der Maus koordiniert MBNL1 den Wechsel von Spleißisoformen, der die Zytoskelettorganisation, die Membran-Erregbarkeit und Differenzierungsprogramme in Muskel-, Herz- und Nervengewebe beeinflusst. Eine Störung der Funktion der MBNL-Protein-Familie ist mit weitreichenden Fehl-Spleißnetzwerken verbunden, die an der Pathobiologie der myotonen Dystrophie und anderen Störungen der RNA-Prozessierung beteiligt sind, wodurch Mbnl1 einen zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung spleißabhängiger Genregulation darstellt. Die MBNL1-abhängige RNA-Prozessierung überschneidet sich zudem mit stressresponsivem Remodeling des Transkriptoms und Veränderungen von Zellzuständen, die mittels isoformaufgelöster RNA-seq und funktioneller Assays erfasst werden können.

MBNL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Mbnl1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MBNL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Mbnl1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MBNL1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Mbnl1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.