Partículas Lentivirales de Activación (h) MAVS: sc-400769-LAC

La MAVS humana (proteína de señalización antiviral mitocondrial) es un adaptador asociado a la mitocondria, esencial para detectar ARN viral citosólico e iniciar la defensa inmunitaria innata. Tras su activación por RIG-I (DDX58) y MDA5 (IFIH1), MAVS ensambla complejos de señalización tipo prión que se propagan a través de vías dependientes de TRAF para activar TBK1/IKKε y el complejo IKK, culminando en programas de interferón tipo I y de genes inflamatorios impulsados por IRF3/IRF7 y NF-κB. La señalización de MAVS se entrecruza con la dinámica mitocondrial, la apoptosis y las respuestas al estrés metabólico, vinculando la homeostasis del orgánulo con la remodelación transcripcional antiviral. La actividad desregulada de la vía de MAVS se ha implicado en cambios en la capacidad de respuesta antiviral, inflamación crónica y mecanismos de evasión inmunitaria relevantes para la biología de las infecciones y modelos de enfermedades asociadas a la inflamación.

Las partículas de activación lentiviral MAVS (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MAVS en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MAVS (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MAVS, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MAVS. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MAVS y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.