Plásmido CRISPR de Activación (h) MAPKAPK-2: sc-401158-ACT

MAPKAPK2 codifica la quinasa 2 de proteínas activada por MAPK (MAPKAPK-2), una quinasa de serina/treonina que actúa como efector principal de la vía de respuesta al estrés p38 MAPK. Tras su activación por MAPK14/p38, MAPKAPK-2 fosforila sustratos como HSPB1 y componentes implicados en la estabilidad del ARNm y el control de la traducción, conectando el estrés ambiental con la remodelación del citoesqueleto y los programas de expresión génica inflamatoria. Este eje de señalización regula la producción de citocinas y las respuestas inmunitarias innatas mediante mecanismos de control postranscripcional, y también se entrecruza con los puntos de control del ciclo celular y la apoptosis bajo estrés genotóxico u oxidativo. La actividad desregulada de MAPKAPK-2 se ha implicado en fenotipos inflamatorios crónicos y en la biología de enfermedades asociadas al estrés, lo que la convierte en un nodo relevante para estudios mecanísticos de la regulación transcripcional y postranscripcional impulsada por la señalización.

MAPKAPK-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAPKAPK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAPKAPK-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAPKAPK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAPKAPK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAPKAPK-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAPKAPK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAPKAPK-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAPKAPK-2 en células tumorales con expresión de MAPKAPK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.