Plasmide CRISPR d'Activation (h) LRIG2: sc-404443-ACT

LRIG2 (répétitions riches en leucine et domaines de type immunoglobuline 2) est une protéine transmembranaire à passage unique impliquée dans la modulation de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase à la surface cellulaire, influençant des voies en aval qui régulent la prolifération, la différenciation et la survie. Grâce à ses domaines extracellulaires LRR/de type Ig, LRIG2 est en mesure de moduler l’amplitude et la durée des réponses aux facteurs de croissance, avec des liens fonctionnels rapportés dans des contextes de signalisation associés à la famille EGFR/ERBB. Une expression altérée de LRIG2 a été observée dans de multiples profils transcriptionnels associés à des maladies, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour étudier la dérégulation de la signalisation, le contrôle du destin cellulaire et les interactions avec le microenvironnement dans les cellules humaines. Ces propriétés font de LRIG2 une cible pertinente pour examiner la régulation des voies proches de la membrane et les programmes d’expression génique associés à une croissance cellulaire anormale.

LRIG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRIG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LRIG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRIG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRIG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LRIG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRIG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LRIG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LRIG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRIG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.