LPL Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400751-ACT

A LPL (lipoproteína lipase) humana codifica uma hidrolase de triglicerídeos secretada que se ancora a proteoglicanos de sulfato de heparano na superfície luminal das células endoteliais capilares, catalisando a hidrólise de triglicerídeos em quilomícrons e VLDL para liberar ácidos graxos livres para captação pelos tecidos. A atividade da LPL coordena a distribuição de lipídios entre o tecido adiposo, o músculo esquelético e o coração, integrando-se a processos de remodelamento de lipoproteínas que envolvem apolipoproteínas e fatores de transporte endotelial. Ao regular a depuração de triglicerídeos circulantes e o fluxo lipídico, a LPL é central para a homeostase metabólica e se conecta a vias que governam o balanço energético, a sensibilidade à insulina e a sinalização lipídica inflamatória. Alterações na expressão ou na função da LPL estão associadas a fenótipos de dislipidemia e à biologia de doenças cardiometabólicas, sustentando estudos mecanísticos em metabolismo lipídico e sistemas vasculares.

LPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LPL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LPL O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LPL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LPL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LPL. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LPL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LPL no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LPL em células tumorais com expressão de LPL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.