Plasmide CRISPR d'Activation (h) LIF: sc-401120-ACT

Le facteur inhibiteur de la leucémie humaine (LIF) est une cytokine pléiotrope de la famille de l’IL-6 qui transmet ses signaux via le complexe récepteur LIFR/gp130 afin d’activer les voies JAK/STAT3, MAPK/ERK et PI3K/AKT. Le LIF régule des décisions de destin cellulaire, notamment l’auto-renouvellement des cellules souches, la différenciation, la survie et le dialogue inflammatoire, avec des effets dépendants du contexte dans les tissus en développement comme chez l’adulte. Une dérégulation de la signalisation du LIF a été impliquée dans les interactions tumeur–stroma, la modulation immunitaire, le remodelage associé à la fibrose et la biologie de la reproduction, ce qui en fait un nœud utile pour l’exploration des voies de signalisation dans des modèles pertinents pour les maladies. En tant que facteur sécrété, le LIF soutient également l’étude de la signalisation paracrine, des réseaux extracellulaires de cytokines et des programmes transcriptionnels en aval de STAT3.

LIF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LIF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

LIF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LIF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LIF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de LIF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LIF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de LIF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie LIF dans les cellules tumorales présentant une expression de LIF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.