Plasmide Double Nickase (h) LATS1: sc-401312-NIC

LATS1 code une kinase sérine/thréonine qui agit comme un effecteur central de la voie de signalisation Hippo, en intégrant des signaux issus de la polarité cellulaire, de l’adhésion et du stress mécanique afin de limiter la prolifération et de favoriser l’apoptose. En phosphorylant des coactivateurs transcriptionnels tels que YAP/TAZ, LATS1 contribue à réguler des programmes contrôlant la progression du cycle cellulaire, l’inhibition de contact et l’homéostasie tissulaire. La dérégulation de la signalisation Hippo dépendante de LATS1 a été associée à une altération du contrôle de la croissance, à l’instabilité génomique et à la transition épithélio-mésenchymateuse dans de multiples contextes tumoraux. LATS1 est donc largement étudié dans les voies gouvernant le contrôle de la taille des organes, la dynamique du cytosquelette et les réseaux de signalisation sensibles au stress.

LATS1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LATS1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LATS1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LATS1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LATS1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.