LATS1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401312-ACT

LATS1 (large tumor suppressor kinase 1) ist eine zentrale Serin/Threonin-Kinase im Hippo-Signalweg, die die Zellproliferation begrenzt und die Apoptose fördert, indem sie wichtige nachgeschaltete Effektoren wie YAP/TAZ phosphoryliert. Durch die Integration von Signalen zur Zelldichte, Polarität, mechanischer Signalgebung und GPCR-Inputs trägt LATS1 zur Aufrechterhaltung der Gewebehomöostase bei, indem es Transkriptionsprogramme einschränkt, die Wachstum und die epithelial–mesenchymale Transition antreiben. Eine fehlregulierte LATS1-Aktivität oder eine Beeinträchtigung des Hippo-Signalwegs ist in zahlreichen Tumorkontexten häufig mit veränderter Kontaktinhibition, genomischer Instabilität und onkogenen Transkriptionszuständen assoziiert. In menschlichen Zellen wird die Funktion von LATS1 zudem mit der Organisation des Zytoskeletts und der Zellzykluskontrolle in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um Signalweg-Crosstalk zu untersuchen, der Proliferation und Differenzierung prägt.

LATS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LATS1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LATS1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LATS1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LATS1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LATS1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LATS1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LATS1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LATS1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LATS1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.