Laminin α-5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401168-ACT

LAMA5 codifica a laminina α-5, uma subunidade central dos heterotrímeros laminina-511 e laminina-521, que organizam as membranas basais e regulam a adesão, a polaridade e a diferenciação de células epiteliais e endoteliais. Por meio de interações com integrinas, distroglicano e outros recetores da matriz extracelular, a laminina α-5 contribui para a sinalização de adesão focal e para vias a jusante, como FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, que coordenam a migração e a sobrevivência celulares. Matrizes ricas em LAMA5 moldam a arquitetura tecidular na pele, no glomérulo renal, no pulmão e na vasculatura, influenciando a função de barreira e a morfogénese. A deposição ou a sinalização desregulada da laminina α-5 está associada a alterações na integridade da membrana basal e tem sido estudada em contextos como fibrose, remodelação inflamatória e microambientes de invasão tumoral.

Laminin α-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAMA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Laminin α-5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAMA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAMA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Laminin α-5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAMA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Laminin α-5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Laminin α-5 em células tumorais com expressão de LAMA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.