Plasmide CRISPR d'Activation (m) Laminin α-2: sc-421375-ACT

Lama2 code la laminine α‑2, une sous-unité glycoprotéique clé de la matrice extracellulaire, qui s’assemble en isoformes laminine‑211/221 au sein des membranes basales du muscle squelettique, des nerfs périphériques et d’autres tissus. La laminine α‑2 soutient l’adhérence cellule–matrice et l’organisation du cytosquelette via des interactions avec les intégrines et le dystroglycane, influençant la signalisation des adhérences focales, la mécanotransduction et le remodelage de la matrice extracellulaire. Dans les modèles murins, la fonction de Lama2 est étroitement liée à la stabilité du sarcolemme et à l’intégrité des myofibres, et une expression modifiée de la laminine α‑2 perturbe l’architecture de la membrane basale et l’homéostasie tissulaire. Ces caractéristiques font de Lama2 un point d’entrée utile pour étudier la régulation de la myogenèse induite par la matrice extracellulaire, les interactions axone–cellule de Schwann et les réponses au stress dans les microenvironnements du tissu conjonctif.

Laminin α-2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Lama2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Laminin α-2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Lama2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Lama2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Laminin α-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Lama2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Laminin α-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Laminin α-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Lama2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.