Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401745
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- L-type Ca++ CP α1D Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im L-type Ca++ CP α1D-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: L-type Ca++ CP α1D: sc-515679
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-401745 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
CACNA1D kodiert die porenbildende α1D‑Untereinheit (CaV1.3) von L‑Typ‑spannungsabhängigen Calciumkanälen, die die Depolarisation der Zellmembran mit dem Ca2+-Einstrom und nachgeschalteter Ca2+-abhängiger Signalübertragung koppeln. CaV1.3 trägt zur Kopplung von Erregung und Transkription bei, indem es die zytosolische Ca2+-Dynamik formt, welche Calcium/Calmodulin‑Signalwege, Kinasekaskaden und aktivitätsabhängige Genexpressionsprogramme reguliert. In nicht erregbaren und erregbaren Zellen beeinflusst die Aktivität von CACNA1D über die Modulation der Calciumhomöostase die zelluläre Differenzierung, Sekretion und elektrophysiologische Eigenschaften. Genetische und regulatorische Veränderungen in CACNA1D wurden mit Erkrankungen in Verbindung gebracht, bei denen abweichende elektrische Signalgebung und eine gestörte calciumabhängige transkriptionelle Kontrolle eine Rolle spielen; dies untermauert mechanistische Studien der Kanalfunktion in krankheitsrelevanten Zellmodellen.
Das L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CACNA1D-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CACNA1D-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CACNA1D nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die L-type Ca++ CP α1D-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CACNA1D-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der L-type Ca++ CP α1D-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf CACNA1D-Exone abzielen, die für die L-type Ca++ CP α1D-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere CACNA1D-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom L-type Ca++ CP α1D CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CACNA1D-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das L-type Ca++ CP α1D HDR-Plasmid (h) und L-type Ca++ CP α1D HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CACNA1D-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CACNA1D-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.