KLF17 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-414317-LAC

KLF17 (Krüppel-like factor 17) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che regola programmi di espressione genica legati alla differenziazione epiteliale, all’identità cellulare e al controllo trascrizionale delle reti associate a proliferazione e motilità. In quanto regolatore che si lega al DNA, KLF17 interagisce con vie trascrizionali più ampie e con percorsi di modulazione della cromatina che definiscono stati di espressione specifici di linea e la segnalazione responsiva allo stress. Un’alterata attività di KLF17 è stata associata a una plasticità epitelio–mesenchimale disfunzionale e a cambiamenti nelle firme trascrizionali legate all’invasività, rendendolo rilevante per studi sulla progressione tumorale e sul potenziale metastatico. Nei sistemi modello umani, KLF17 viene comunemente studiato per i suoi effetti sulle transizioni di stato cellulare, sulla migrazione e sulla regolazione dipendente dal contesto dei bersagli a valle.

Le particelle di attivazione lentivirale KLF17 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di KLF17 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale KLF17 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione KLF17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di KLF17. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo KLF17 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.