Plásmido CRISPR de Activación (h) KIR3.1: sc-404965-ACT

KCNJ3 codifica la subunidad humana del canal de potasio rectificador entrante KIR3.1 (GIRK1), un componente central de los canales Kir (GIRK) activados por proteínas G que acoplan la señalización de los GPCR a la hiperpolarización de la membrana. Al formar canales heterotetraméricos con otras subunidades GIRK, KIR3.1 ayuda a regular la excitabilidad neuronal, la actividad marcapasos y la neurotransmisión inhibitoria mediante el control de la conductancia de potasio. Este eje de canales iónicos se integra con la señalización dependiente de cAMP/PKA y con el manejo posterior del calcio para moldear los patrones de disparo y la respuesta sináptica. La expresión alterada de KCNJ3 o la actividad de los canales GIRK se ha asociado con fenotipos relacionados con la electrofisiología y se investiga con frecuencia en el contexto de la regulación neurológica y del ritmo cardíaco, así como en modelos celulares de excitabilidad y transducción de señales.

KIR3.1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNJ3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KIR3.1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNJ3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNJ3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KIR3.1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNJ3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KIR3.1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KIR3.1 en células tumorales con expresión de KCNJ3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.