Plasmide CRISPR d'Activation (h) KIF17: sc-403046-ACT

KIF17 (kinesin family member 17) code un moteur de microtubules dirigé vers l’extrémité plus, qui soutient le transport intracellulaire dans les cellules polarisées, avec des rôles majeurs dans le trafic des cargos neuronaux et la compartimentalisation ciliaire. En couplant une motilité dépendante de l’ATP à la dynamique des microtubules, KIF17 contribue à des processus tels que le transport dendritique, la fonction synaptique et la régulation des voies de signalisation associées au cil. Des altérations de l’expression ou de la localisation de KIF17 ont été étudiées dans le cadre de phénotypes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi que de défauts de trafic et de signalisation pertinents pour les ciliopathies. Ces caractéristiques font de KIF17 une cible utile pour explorer le transport basé sur les microtubules, la biologie cellulaire neuronale et les réseaux régulateurs liés aux cils.

KIF17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KIF17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

KIF17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KIF17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KIF17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de KIF17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KIF17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de KIF17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie KIF17 dans les cellules tumorales présentant une expression de KIF17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.