Ki67 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421656

Descripción general

Mki67 codifica la proteína marcadora de proliferación Ki67, un factor nuclear estrechamente ligado a la progresión del ciclo celular y ampliamente expresado en células que están ciclando activamente, pero ausente en estado de quiescencia. Ki67 se asocia con la cromatina y con la periferia de los cromosomas mitóticos, apoyando la organización cromosómica y contribuyendo a una progresión mitótica adecuada y a la estructura nucleolar durante la interfase. Su expresión se integra con los programas centrales de control del ciclo celular, incluidas las vías que regulan la replicación del ADN, la mitosis y los puntos de control, por lo que se utiliza ampliamente para cuantificar estados proliferativos en tejidos y en células cultivadas. Los niveles desregulados de Ki67 se correlacionan con frecuencia con fenotipos hiperproliferativos y se aprovechan en estudios de biología tumoral, regeneración tisular y expansión de células inmunitarias en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ki67 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Mki67 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Mki67 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Mki67 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ki67.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Mki67 para la investigación de la señalización de Ki67, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Mki67 críticos para la función de Ki67
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Mki67 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Ki67 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ki67 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Mki67. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ki67 (m) y el plásmido HDR Ki67 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Mki67 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Mki67 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.