KCNQ2 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402492-NIC

KCNQ2 codifica uma subunidade de canal de potássio dependente de voltagem que se monta para formar correntes neuronais do tipo M (Kv7), moldando o potencial de membrana em repouso e regulando o disparo de potenciais de ação. Ao controlar a excitabilidade sub-limiar e a adaptação da frequência de disparo, KCNQ2 integra-se em processos de sinalização que acoplam a dinâmica do potencial de membrana à neurotransmissão e à estabilidade das redes neurais. Alterações na função de KCNQ2 têm sido associadas a fenótipos de neurodesenvolvimento e relacionados com epilepsia, tornando-o um alvo fundamental para dissecar mecanismos de excitabilidade e regulação de circuitos sinápticos em modelos de células humanas. As aplicações de pesquisa incluem, com frequência, o estudo da biofísica de canais iónicos, os resultados da diferenciação neuronal e alterações ao nível de vias na expressão génica dependente da atividade.

KCNQ2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus KCNQ2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de KCNQ2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função KCNQ2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com KCNQ2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.