JAM-A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400687-ACT

F11R codifica la junctional adhesion molecule A (JAM-A), una proteina della superfamiglia delle immunoglobuline concentrata nelle tight junctions, dove regola l’integrità della barriera epiteliale ed endoteliale, la polarità cellulare e la permeabilità paracellulare. JAM-A partecipa all’assemblaggio e al rimodellamento delle giunzioni attraverso interazioni con proteine scaffold come ZO-1 e afadin, influenzando l’organizzazione del citoscheletro di actina e la segnalazione delle piccole GTPasi legata alla migrazione. Contribuisce inoltre alla transmigrazione dei leucociti e alla biologia piastrinica modulando l’adesione cellula-cellula e il traffico infiammatorio. Un’espressione o una localizzazione deregolata di JAM-A è stata associata a disfunzione di barriera e a fisiopatologia infiammatoria, ed è spesso studiata nel contesto dell’adesione e dell’invasione delle cellule tumorali e delle interazioni con il microambiente.

JAM-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di F11R senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

JAM-A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus F11R nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione F11R, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di JAM-A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus F11R nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da JAM-A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via JAM-A nelle cellule tumorali con espressione di F11R silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.