IRE1α Double Nickaseプラスミド (h): sc-400576-NIC

ERN1は、イノシトール要求性酵素1α（IRE1α）をコードする。IRE1αは小胞体（ER）膜に局在する膜貫通型のキナーゼ／エンドリボヌクレアーゼで、折り畳み不全タンパク質の主要なセンサーとして機能し、アンフォールドド・プロテイン・レスポンス（UPR）の中心的ハブを担う。ERストレス下ではIRE1αがオリゴマー化し、RNase活性を介したXBP1 mRNAのスプライシングおよびIRE1依存的分解（RIDD）を活性化することで、プロテオスタシス、分泌能、炎症、アポトーシスを制御する転写・翻訳プログラムを再編成する。さらに、PERKおよびATF6シグナルとのクロストークや、下流でのJNKおよびNF-κB経路の活性化を通じて、ERN1は自然免疫シグナルと代謝適応にも影響を及ぼす。IRE1α–XBP1活性の破綻は、慢性的ERストレスを特徴とする病態（がん細胞の生存プログラム、神経変性、糖尿病、炎症性疾患など）に関与するとされ、機構解明研究における一般的な標的となっている。

IRE1α ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ERN1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ERN1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ERN1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ERN1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。