Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421192
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IP3R-I O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico IP3R-I, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:IP3R-I Anticorpo (E-8): sc-271197
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421192 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Itpr1 codifica o receptor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 1 (IP3R-I), um canal de liberação de Ca²⁺ do retículo endoplasmático que converte o IP3 gerado a jusante de receptores acoplados à PLC em sinais de cálcio no citosol. Os transientes de Ca²⁺ mediados pelo IP3R-I coordenam a transmissão sináptica, a excitabilidade neuronal, a expressão gênica e o metabolismo mitocondrial, e modulam processos dependentes de Ca²⁺, como a autofagia e a apoptose. Em camundongos, Itpr1 é altamente relevante para a função de circuitos neurais, particularmente em neurônios de Purkinje do cerebelo, e é frequentemente estudado no contexto da coordenação motora e de fenótipos celulares associados à neurodegeneração. Alterações na sinalização do IP3R-I também estão ligadas a defeitos mais amplos na homeostase de Ca²⁺, que afetam as respostas ao estresse do RE e redes de sinalização intracelular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IP3R-I (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Itpr1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Itpr1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Itpr1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IP3R-I.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Itpr1 para a investigação da sinalização de IP3R-I, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Itpr1 críticos para a função IP3R-I
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Itpr1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo IP3R-I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Itpr1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo IP3R-I Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR IP3R-I (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Itpr1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Itpr1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.