Plásmido Doble Nickase (h) Integrin αM/CD11b: sc-400563-NIC

El ITGAM humano codifica la integrina αM (CD11b), que se heterodimeriza con ITGB2 para formar Mac-1/CR3, un receptor de adhesión leucocitaria y del complemento central para la función inmunitaria innata. CD11b media la adhesión firme y la migración transendotelial mediante interacciones con ICAM, favorece la fagocitosis de dianas opsonizadas con iC3b y contribuye a la señalización “outside-in” que modula la remodelación de actina y los programas de genes inflamatorios. Estas actividades se integran con la señalización de integrinas, el “cross-talk” con receptores Fc y el tráfico guiado por quimiocinas en células mieloides como neutrófilos, monocitos, macrófagos y determinados subgrupos de células dendríticas. La adhesión y la señalización efectora dependientes de CD11b, cuando están desreguladas, se estudian con frecuencia en inflamación y autoinmunidad, en la patogénesis de enfermedades infecciosas y en el comportamiento de células mieloides en microambientes inmunitarios asociados a tumores.

Integrin αM/CD11b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGAM en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGAM. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGAM. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGAM alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.