Integrin αL/ITGAL/CD11a Plasmide Double Nickase (h): sc-402246-NIC

ITGAL codifica l’integrina αL (CD11a), che eterodimerizza con l’integrina β2 (CD18) formando LFA-1, un recettore di adesione dei leucociti essenziale per il traffico delle cellule immunitarie e le interazioni cellula–cellula. Il legame di LFA-1 con i ligandi della famiglia ICAM regola l’adesione stabile, la migrazione transendoteliale e la formazione della sinapsi immunologica, collegando segnali extracellulari al rimodellamento del citoscheletro e a vie di segnalazione quali la segnalazione integrinica “outside-in”, l’attivazione delle chinasi della famiglia SRC e processi associati alle adesioni focali. L’attività di ITGAL influisce sulle soglie di attivazione dei linfociti, sulle funzioni effettrici dipendenti dall’antigene e sul coordinamento delle risposte infiammatorie. Interazioni LFA-1–ICAM deregolate e un’espressione alterata di ITGAL sono implicate in patologie immunomediate e in difetti di adesione leucocitaria, a supporto del suo impiego in studi su infiammazione, autoimmunità e dinamiche del microambiente tumorale–immunitario.

Integrin αL/ITGAL/CD11a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ITGAL nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ITGAL. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ITGAL. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ITGAL interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.