Integrin α6/ITGA6/CD49f Plasmide Double Nickase (m): sc-421164-NIC

Itga6 codifica l’integrina α6 (ITGA6/CD49f), una subunità α che eterodimerizza principalmente con β1 o β4 per formare recettori leganti la laminina che ancorano le cellule alle membrane basali. ITGA6 partecipa all’organizzazione delle adesioni focali e degli emidesmosomi, collegando l’interazione con la matrice extracellulare alla segnalazione intracellulare attraverso le vie FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, che regolano adesione, sopravvivenza e migrazione. Nei tessuti murini, l’integrina α6 è arricchita nei compartimenti epiteliali e nelle popolazioni staminali/progenitrici, dove influenza la polarità e le interazioni con la nicchia durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale. Un’espressione o una segnalazione di ITGA6 disregolata è spesso studiata in contesti di adesione cellula–matrice alterata, programmi di invasione e rimodellamento infiammatorio, rendendola rilevante per modelli meccanicistici di malattia.

Integrin α6/ITGA6/CD49f Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Itga6 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Itga6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Itga6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Itga6 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.